A Simple and Efficient Method to Isolate LTR Sequences of Plant Retrotransposon

Table 2

The components of three PCR rounds, respectively.

Component	First PCR amplification	Second PCR amplification	Third PCR amplification
Template DNA	50–100 ng	1000 times dilution of PCR products from the first PCR	1000 times dilution of PCR products from the second PCR
Buffer (TaKaRa)	1x	1x	1x
Mg^2+	2.5 mmol·L^−1	2.5 mmol·L^−1	2.5 mmol·L^−1
dNTPs	0.2 mmol·L^−1	0.2 mmol·L^−1	0.2 mmol·L^−1
RNase H1 primer	0.4 𝜇mol·L^−1	—	—
RNase H2 primer	—	0.4 𝜇mol·L^−1	—
ACP primer	0.8 𝜇mol·L^−1	—	—
PPT primer	—	—	0.4 𝜇mol·L^−1
Universal primer UP	—	0.4 𝜇mol·L^−1	0.4 𝜇mol·L^−1
Taq polymerase	1.0 U	1.0 U	1.0 U
Total volume	10 𝜇L	20 𝜇L	20 𝜇L